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流式细胞仪完整的流式实验介绍

流式细胞仪(Flow cytometer )是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。下面就让小编带你了解一下完整的流式实验是怎样的。

一、处理样品

1.制作单细胞悬液

浓度在5*10的五次方和10的六次方/ml。

外周血、骨sui、培养细胞、组织经过尼龙网300目过滤制成细胞悬液。

15.jpg

2.挑选适合的荧光染料进行染色

流式细胞仪上的激光器必须能够激发此荧光染料。

激发的光谱必须能够被仪器上的滤光片所接受。

应该尽量减少荧光素光谱的重叠。

二、确定仪器的条件

1.电压

在液流中,粒子通过激光束时产生光信号,光信号通过光电探测器转换成电压。信号随着电压的改变而变化。

BD流式细胞仪有光电二极管和光电倍增管两种类型的光电探测器。

2.阈值

信号放大过程中会产生不需要的脉冲信号,可以设定某一信号的最低强度值来去除不需要的脉冲信号。设定的值被称为阈值。

3.荧光补偿

荧光补偿是采用适合的方法校正荧光染料间叠加产生的误差。

补偿调整实验过程

1)样品准备

阴性样本,单阳性样本。

2)调整

第一步:阴性样本调整所有的PMT。单阳性样本调整补偿。

3)判断标准

数据分析

1)设门

设门就是选定要分析的目标细胞

2)设定阴性和阳性群体的界限

3)确定阳性和阴性的细胞群体

4)统计阳性或阴性细胞群体的百分率,平均荧光值,绝对数或抗原子结合数。

流式检测结果的表示

1.百分率

2.绝对计数

3.平均荧光强度

4.直方图和散点图




2019-04-15 14:34:41 浏览次数:24次