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流式细胞仪使用的技巧

流式细胞仪是在流动状态下检测细胞中各种物理和生物特征的一种仪器。下面就让小编带你了解一下流式细胞仪使用的一些技巧。

技巧1.png

一、对目标细胞群体进行定位

如果寻找外周血白细胞,那么在FSC/SSC散点图中信号最强的是粒细胞,其后是单核,淋巴,红细胞碎片。如果寻找淋巴细胞,可先调低FSC/SSC电压找到粒细胞后再调高电压找其他细胞群。如果是没有明显特征的细胞群,可以用已经建立的淋巴细胞检测方案依据相对位置找寻目标细胞群。

技巧2.png

二、阴性或者阳性对照

阴性对照:调整PMT电压,设立阴性或者阳性界限。

使用抗体相应同型荧光免疫球蛋白作为阴性对照,对照和抗体必须来自同一个厂家(检查过性样本中的一些指标)。

使用对照组样本作阴性对照(和其他实验中的对照组含义一样,但依然需要初始化阴性对照仪器)。

对非抗体染色,使用空白样本作阴性对照,或者设立阳性对照。

三、检测指标

检测前要明白,不仅有阳性百分率指标,而且还有荧光强度指标。并且荧光强度指标比阳性百分率指标更有价值。

检测时,应当灵活使用放大模式,线性放大或者对数放大(如果指标相差不大,通常使用线性;而荧光参数一般使用对数放大)。

灵活应用设门的逻辑关系和颜色示踪 功能。

合理选择不同的荧光素标记试剂,以便用最少的投入获得最多的信息。


2019-04-15 15:01:39 浏览次数:97次