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微生物培养基的灭菌方法

2018-08-30 09:23:16  来源:内容来源于网络 浏览量:506次
【导读】微生物培养基是供微生物生长和维持用的人工配制的养料,不同培养基可根据实际需要,添加一些自身无法合成的化合物,即生长因子。按照培养基的成分来分培养基按其所含成分,可分为合成培养基、天...

微生物培养基是供微生物生长和维持用的人工配制的养料,不同培养基可根据实际需要,添加一些自身无法合成的化合物,即生长因子。按照培养基的成分来分培养基按其所含成分,可分为合成培养基、天然培养基和版合成培养基三类。按照微生物的种类分培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。培养基应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。为了达到特定要求的研究,需要进行培养基配制和灭菌。那么有哪些呢?

灭菌的方法,通常可以分为加热灭菌(包括直接灼烧灭菌、干热灭菌、加压蒸汽灭菌、间歇灭菌和煮沸消毒)、过滤去菌、射线灭菌和消毒、化学药剂灭菌和消毒四大类。下面具体讲解。

1.干热灭菌法(即热空气灭菌法)

干热灭菌一般是利用电热烘箱作为干热灭菌器。前面所包装好的玻璃器皿,如带棉塞的三角瓶,试管、包装好的吸管、培养皿等,放入电热烘箱中。

打开烘箱顶部的通气孔,接上电源加热,使箱内空气的温度达到160℃~170℃,关闭通气孔使箱内的温度保持在160℃左右并维持1.5-2h。时间一到,切断电源。待温度下降60℃~70℃以下,方可打开箱门取灭菌物品,否则骤冷后易使箱内玻璃仪器破损。

2.加压蒸气灭菌法

利用高压灭菌器,使水的沸点在密闭的灭菌器内随压力升高而增高,来提高蒸汽的温度和灭菌的效率。

在同一温度下湿热的杀菌效率比干热大,因为微生物细胞蛋白质在湿热情况下,易干凝固。同时湿热的穿透力强,当水蒸汽与被灭菌的物品相接触后,便放出汽化潜热,逐步提高被灭菌物品的温度,直至与水蒸汽的温度相等,达到平衡为止,从而提高灭菌效率。

手提式高压灭菌锅灭菌的操作步骤如下:

(1)在灭菌器内加入一定量的水(有的灭菌器内加水至止水线)。将用防水纸包扎好的灭菌物品如培养基、无菌水等,放进灭菌器内。

(2)接通电源,进行加热。

(3)当压力到达5bl/in2时,打开放气阀,使锅内的空气和水蒸汽一同排出,直至压力表的压力恢复到零,然后关闭排气阀,继续加热。

(4)当压力表*的压力到达15bl/in2(即1.05kg/cm2)时,此时灭菌器内的温度达到121℃,维持30min不变。对热不稳定的培养基灭菌时,应适当降低压力,延长时间。

(5)灭菌时间一到,切断电源,待压力下降至零时,才能打开排气孔,然后打开灭菌器盖,取出物品。如果灭菌后的固体培养基要做成斜面,需趁热放置。还需检查培养基灭菌是否彻底。

3.间歇灭菌法

常采用阿诺(Arnold)氏灭菌器和柯赫(Koch)氏灭菌器或蒸笼灭菌,常压条件下蒸汽温度不超过100℃。在没有高压灭菌器设备的情况下或不宜加压灭菌的物品,可采用此法灭菌。

方法是:待灭菌物品放在灭菌器或蒸笼里,每d蒸煮1次,每次煮沸lh,连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间,将物品(指培养基)放在37C恒温条件下培养,这样可以使每次蒸煮后未杀死的残留芽孢萌发成营养体,以便下1次蒸煮时杀灭。

4.过滤除菌法

一些不能加热灭菌的液体物质(如维生素、血清),可以用过滤除菌法,一般用细菌过滤器进行除菌。

细菌过滤器中的过滤板常用陶瓷、硅藻土或石棉等做成,过滤板孔眼很小,细菌不能通过。因此,过滤后的液体就除去了细菌。在进行过滤除菌前,整个细菌过滤器和接受液体的器皿,必须要包装妥当并进行加压蒸汽灭菌后方可使用。

下面介绍石棉板滤器的构造及其操作方法。石棉板滤器又称蔡氏(Scitz)滤器,它是由石棉制成的圆形滤板和一个特制漏斗组成。此漏斗分上下两节。上节为圆形金属筒,下节为金属漏斗。两节由三个活动螺旋固定,便于装卸。使用时拆开两节,将滤板放在漏斗上的金属筛板,再加上上节,然后将螺旋扭紧,将欲滤溶液置于滤器中抽滤。每次过滤必须用一张无菌的新滤板。石棉板滤器因容积大小不同而有各种型号,石棉板也有不同规格型号使用时必须根据需要搭配妥当。

5.紫外线灭菌

波长260~280nm之间的紫外线有很强的杀菌能力,一般紫外灯管能产生253.7nm的紫外光,杀死力强而稳定,但穿透力弱一般只适宜物体表面、空气灭菌。例如接种室、培养室、手术室、药厂包装室等空气灭菌。一般30w灯管、9m3空间,距地面2m每次打开紫外线照射0.5h,就使室内空气灭菌。若照射紫外线时,先喷洒石碳酸等化学消毒剂,可增强灭菌效果。

在进行微生物接种和分离等操作时,常须用紫外线来杀灭接种室(箱)空气、台面等处的微生物。

紫外线虽有较强的杀菌力,但穿透力较弱,即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除,因此只适用于空气及表面杀菌。

紫外线对眼粘膜及视神经有强烈的损伤作用,对皮肤有刺激作用,所以不能直接在紫外线灯开启下工作和用眼睛直视开启的紫外灯。

6.化学药剂消毒灭菌

微生物实验室中常用的化学杀菌剂有甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、新洁尔灭、煤酚皂溶液,它们有的是杀菌剂,有的是抑菌剂,

以上就是说明,如果你的培养基中所有的成分都可以耐高温,那就用压力蒸汽高温灭菌的方式。如果你的培养基中有些成分不耐高温,就可以用除菌过滤的方式除菌:用除菌滤器过滤培养基至已灭菌的培养器中。如何要求不高,部分试验用培养基,可以用煮沸的方式灭菌。


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